每天和分子生物学打交道的小伙伴，想必也经常被引物不特异搞的头晕脑胀，今天小编给大家推荐屡试不爽的引物设计方法，就是用NCBI在线设计，主要步骤如下： 然后可以在“Primer Parameters”条目下将设置上下游起始位置，产物大小，退火温度等重要参数。