通常酶的扩增效率无法达到100%，达到1个拷贝模板的循环数可能会达到38或更高，如下图我用qPCR和数字PCR测到了1拷贝模板对应的Ct值为37.91。

因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。 同时，EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBRGreen I 扩增信号（图 1）。 较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 2）。

ROX是一种惰性参比荧光染料，能被qPCR仪检测到，但其荧光信号值在qPCR反应中基本保持不变，不会随着qPCR扩增而增强，不会对qPCR反应产生影响（如图 ...